GB/T 4789.2-2022 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定

[所属分类:GB/T 4789] [发布时间:2017-8-4] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB4789.2—2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验 菌落总数测定
2 0 1 6 - 1 2 - 2 3发布 2 0 1 7 - 0 6 - 2 3实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局 发 布
GB4 7 8 9.2—2 0 1 6
Ⅰ
前 言
本标准代替 GB4 7 8 9.2—2 0 1 0《 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》。
GB4 7 8 9.2—2 0 1 6
1
食品安全国家标准
食品微生物学检验 菌落总数测定
1 范围
本标准规定了食品中菌落总数(A e r o b i cp l a t ec o u n t)的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语和定义
菌落总数 a e r o b i cp l a t ec o u n t
食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样
中形成的微生物菌落总数。
3 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
3.1 恒温培养箱:3 6 ℃±1 ℃,3 0 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱:2 ℃~5 ℃。
3.3 恒温水浴箱:4 6 ℃±1 ℃。
3.4 天平:感量为0.1g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管:1mL(具0.0 1mL 刻度)、1 0mL(具0.1mL 刻度)或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶:容量2 5 0mL、5 0 0mL。
3.9 无菌培养皿:直径9 0mm。
3.1 0 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3.1 1 放大镜或/和菌落计数器。
4 培养基和试剂
4.1 平板计数琼脂培养基:见 A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液:见 A.2。
4.3 无菌生理盐水:见 A.3。
5 检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
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图 1 菌落总数的检验程序
6 操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品:称取2 5g样品置盛有2 2 5mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,
80 0 0r /m i n~1 00 0 0r /m i n均质1m i n~2m i n,或放入盛有2 2 5mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式
均质器拍打1m i n~2m i n,制成1∶1 0的样品匀液。
6.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取2 5mL样品置盛有2 2 5mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶
(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶1 0的样品匀液。
6.1.3 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1∶1 0样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液
的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其
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混合均匀,制成1∶1 0 0的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作,制备1 0 倍系列稀释样品匀液。 每递增稀释一次,换用1 次1 mL 无菌吸管或
吸头。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在
进行1 0倍递增稀释时,吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。 同时,分别吸取
1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6 及时将1 5mL~2 0mL冷却至4 6 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于4 6 ℃±1 ℃恒温水浴箱
中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
6.2 培养
6.2.1 待琼脂凝固后,将平板翻转,3 6 ℃±1培养4 8h±2h。 水产品3 0 ℃±1 ℃培养7 2h±3h。
6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层
琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养。
6.3 菌落计数
6.3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。 菌落计数以
菌落形成单位(c o l o n y - f o r m i n gu n i t s,CFU)表示。
6.3.2 选取菌落数在3 0CFU~3 0 0CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 低于3 0CFU
的平板记录具体菌落数,大于3 0 0CFU 的可记录为多不可计。 每个稀释度的菌落数应采用两个平板的
平均数。
6.3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释
度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以
2,代表一个平板菌落数。
6.3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
7 结果与报告
7.1 菌落总数的计算方法
7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平
均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。

7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:

N = 
式中:
N — — —样品中菌落数;

C— — —平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
n1 — — —第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
n2 — — —第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
d — — —稀释因子(第一稀释度)。 

示例:

稀释度	1∶1 0(第一稀释度)	1∶10 0(第二稀释度)
菌落数(CFU)	2 3 2,2 4	3,3 5

7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于3 0 0CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可
记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于3 0CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数
计算。
7.1.5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在3 0CFU~3 0 0CFU 之间,其中一部分小于3 0CFU 或大于
3 0 0CFU 时,则以最接近3 0CFU 或3 0 0CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2 菌落总数的报告
7.2.1 菌落数小于1 0 0CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
7.2.2 菌落数大于或等于1 0 0CFU 时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用
0代替位数;也可用1 0的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
7.2.4 若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
7.2.5 称重取样以 CFU/ g为单位报告,体积取样以 CFU/mL为单位报告。

附 录 A
培养基和试剂
A.1 平板计数琼脂(p l a t ec o u n ta g a r,P CA)培养基
A.1.1 成分
胰蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 2.5g
葡萄糖 1.0g
琼 脂 1 5.0g
蒸馏水 10 0 0mL
A.1.2 制法
将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节 pH 至7.0±0.2。 分装试管或锥形瓶,1 2 1 ℃ 高压灭菌
1 5m i n。
A.2 磷酸盐缓冲液
A.2.1 成分
磷酸二氢钾(KH2PO 4) 3 4.0g
蒸馏水 5 0 0mL
A.2.2 制法
贮存液:称取3 4.0g的磷酸二氢钾溶于5 0 0mL蒸馏水中,用大约1 7 5mL的1mo l / L氢氧化钠溶
液调节pH 至7.2,用蒸馏水稀释至10 0 0mL后贮存于冰箱。
稀释液:取贮 存 液 1.2 5 mL,用 蒸 馏 水 稀 释 至 10 0 0 mL, 分 装 于 适 宜 容 器 中,1 2 1 ℃ 高 压 灭 菌
1 5m i n。
A.3 无菌生理盐水
A.3.1 成分
氯化钠 8.5g
蒸馏水 10 0 0mL
A.3.2 制法
称取8.5g氯化钠溶于10 0 0mL蒸馏水中,1 2 1 ℃高压灭菌1 5m i n。