平板划线

[所属分类:技术资料] [发布时间:2020-5-14] [发布人:] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

平板划线分离法是把混杂在一起的微生物或同一种微生物群体中的不同细胞用接种环在培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生成繁殖成单菌落。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次做“由点到线”稀释而达到分离目的。这也是微生物检测人员必须具备的基本技能之一。

首先给大家展示一下平板划线的标准范例，人家划出的平板是这样的：

这样的：

当然还有这样的：

这都是别人家的平板，是不是很有艺术气息，是不是很美！然而现实情况很多是这样的：

还有这样的：

其实微生物检测也是一项很富有艺术气息的工作，您是不是也想划出那些标准的平板呢？

1.操作前准备：将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。

2.擦拭：用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。

3.物品摆放：将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。

4.点燃酒精灯：打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。

5.灼烧接种环：右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。

6.取菌种：左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。

7.接种：左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。具体的划线顺序如下图：

8.培养：将接种完毕的平板放于恒温培养箱中倒置培养。

9.整理台面：操作完毕后，将实验所需的物品放回原处，并将实验所产生的垃圾清理干净，带出超净台，放于垃圾桶中。

10.结果观察：72小时后，观察平板，应无杂菌污染，若菌种不在划线的线上则为杂菌；线应为直的，且每一线都接近平板边缘，平行的线和线之间要紧密，但不能搭在一起；要有较多的单菌落，至少应有10个以上的单菌落方为合格。

详细的操作要点：