4%过氧化氢消毒效力考察方案

 

 

验 证 方 案

 

文件名称：4%过氧化氢消毒效力考察方案
文件编号：VP-09-LM008-2014
部门		职务	签名	日   期
制定人	品质保证部	QC		年    月   日
审核人	生产部	副经理		年    月   日
	生产部	副经理		年    月   日
	设备能源部	副经理		年    月   日
	品质保证部	验证主管		年    月   日
批准人	品质保证部	经理		年    月   日

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

目录

一.目的 1

二.范围 1

三.验证小组组成及职责 1

四.验证进度 1

五.验证依据 1

六.概述 2

七.验证前准备工作 2

八.验证内容 3

1.验证用菌种 3

2.过滤冲洗法去除残留消毒剂试验 4

3.细菌繁殖体定量杀灭试验 6

4.真菌杀灭试验 8

5.验证次数 9

6.消毒剂有效期验证试验 9

九.验证数据及评估 10

十.偏差及异常情况处理 10

十一.确认评价和建议 10

十二.再验证及周期 10

十三.验证文件归档 10

十四.附表 10

 

一.目的 

本方案的目的在于考察消毒剂的消毒效力以及确认在储存限期内的有效性、重现性。

二.范围 

本方案适用于公司常用消毒剂4%过氧化氢溶液的消毒效力及有效期的验证。

三.验证小组组成及职责

验证小组	部门	人员	职务	职责
组长	品质保证部		经理	负责组织验证方案的具体实施及实施过程的监督检查及工作的协调，确保确认进度。
成员	品质保证部		QC	1.负责本验证方案的起草； 2.负责本验证方案的培训及培训记录； 3.负责本验证的具体实施； 4.负责验证数据的收集、整理、分析，并组织完成验证报告。
成员	品质保证部		微生物组长	1.负责本验证的具体实施； 2.负责验证数据的收集、整理、分析。
成员	品质保证部		QC
成员	品质保证部		QC
成员	品质保证部		验证主管	1.负责验证过程中的偏差处理； 2.负责本验证方案的归档。
成员	品质保证部		QA	负责QC实验室系统运行情况及人员操作情况的监控。

四.验证进度

验证小组制定验证计划，经批准后实施，本验证活动分三个阶段完成：

验证时段	验证内容	验证时间
第一阶段	验证前准备工作	2014年11月27日
第二阶段	验证内容实施	2014年12月01日～2014年12月08日
第三阶段	数据收集、整理、分析，起草验证报告	2014年12月01日～2014年12月15日

五.验证依据

—《药品生产验证指南》2003版

—《中国药典》2010年版二部附录

—《中国药品检验标准操作规范与药品检验仪器操作规程》2010年版

—《药品生产质量管理规范》2010版

—《消毒技术规范》2008版

六.概述

消毒剂的消毒效果评价，是以消毒剂与微生物接触后，测定残留的微生物数量，以杀灭率表示结果，对消毒剂杀灭效果进行评价。为准确了解消毒剂对微生物的杀菌作用，在消毒试验中选用过滤冲洗法，去除残留消毒剂。

消毒剂的有效期验证，是为了验证消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会变化，符合要求。

七.验证前准备工作

1.相关文件确认

确认本验证中使用到的下列文件是现行版本，并在相关地点存放。

序号	文件编号	文件名称	文件存放地点
1	SOP-QC-10040	sartorius三联式微生物限度检测系统标准操作规程	QC实验室文件柜
2	SOP-QC-10003	Thermo Scientific 1300型生物安全柜标准操作规程	QC实验室文件柜
3	SOP-QC-10045	SSW-600-2S型电热恒温水槽标准操作规程	QC实验室文件柜
4	SMP-QC-00014	菌种管理规程	QC实验室文件柜
5	SMP-QC-00017	培养基、稀释液、冲洗液管理规程	QC实验室文件柜
6	SMP-VM-00001	验证管理规程	QC实验室文件柜
7	SMP-QA-00001	文件管理规程	QC实验室文件柜
8	SMP-PM-00001	清洁剂、消毒剂管理规程	QC实验室文件柜
9	SOP-QC-10032	LRH-250型生化培养箱标准操作规程	QC实验室文件柜
10	SOP-QC-10033	MJ-250B型霉菌培养箱标准操作规程	QC实验室文件柜
11	SOP-QC-10034	SPX-150B霉菌培养箱标准操作规程	QC实验室文件柜
12	SOP-QC-10035	SPX-250B生化培养箱标准操作规程	QC实验室文件柜

开展验证前，应对以上文件进行确认，填写附表1。

2.相关仪器设备、菌种、培养基等确认

2.1.确认本验证过程中使用的生物安全柜、电热恒温水槽等经过校验，且在有效期内。

2.2.确认本验证过程中使用的培养基、菌种符合本验证方案要求，采购自可靠合法的供应商，且在有效期内。

2.3.对以上信息进行一一确认，并填写附表2。

3.人员培训

3.1.验证小组全体人员在验证前接受了验证方案及验证相关内容的培训。

3.2.验证小组人员培训情况表（见附表3）。

4.过滤冲洗法去除残留消毒剂试验

该试验目的是通过滤膜过滤和冲洗的方法，去除消毒体系中的残留消毒剂，使消毒剂鉴定试验显示出真正的杀菌效果。

标准规定：过滤冲洗法应能有效去除消毒体系中的残留消毒剂，且试验操作不影响试验菌的生长数量。

5.细菌繁殖体定量杀灭试验

在指定的最低浓度与最短作用时间，重复试验3次。求菌悬液定量杀灭试验中，各次杀灭细菌的百分率（杀灭率）。

6.真菌杀灭试验

按指定的使用浓度和作用时间，重复试验3次 ，求出对白色念珠菌和黑曲霉菌各次试验的杀菌百分率。

7. 4%过氧化氢消毒剂所需进行的验证项目

　　　　　　　　　　4%过氧化氢消毒剂验证项目列表

品 名	验证用浓度	去除残留消毒剂试验	杀灭试验		有效期验证试验
			细菌繁殖体	真菌
过氧化氢	4%	＋	＋	＋	＋

表中“＋”表示需进行验证的项目，“－”表示无需进行验证的项目

4%过氧化氢消毒剂与不同微生物作用的最短时间见下表：

品 名	细菌繁殖体	真菌	细菌芽孢
4%过氧化氢	5min	5min	－

当消毒剂说明书中未写明最短作用时间及最低使用浓度时，使用上述最短作用时间及最低使用浓度。

关于消毒剂最低使用浓度及最短作用时间的选择一般按上述要求进行，特殊情况时（如使用消毒剂浓度确定不变时）可按实际使用情况自行选择验证用作用时间和消毒剂浓度。

八.验证内容

1.验证用菌种

1.1. 本方案使用的菌种

—金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC(B) 26 003〕

—大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC(B) 11 102〕

—铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B）10104〕

—生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC(B) 64 941〕

—黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(B) 98 003〕

—白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC(B) 98 001〕

1.2. 菌液制备

1.2.1.接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至试验要求菌液的稀释级。

1.2.2.将生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至试验要求菌液的稀释级。

1.2.3.接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至试验要求菌液的稀释级。

1.2.4.接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28℃培养5～7天，加含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液3～5ml洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌液加含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至试验要求菌液的稀释级。

详细操作可参见《菌种管理规程SMP-QC-00014》。

1.3. 注意事项

验证用菌种代次为2～5代，制备好的菌液储存于4℃冰箱内，应在制备当日内使用。

2.过滤冲洗法去除残留消毒剂试验

2.1.目的

在化学消毒试验中，达到规定消毒时间终点时，要求立即过滤以终止残留消毒剂的继续作用，以便准确检测出消毒体系中残留存活的微生物及其数量。因为消毒体系中残留的消毒剂，可能对微生物的生长繁殖具有一定抑制作用，从而可导致对杀菌效果偏好的错误判断，甚至产生假阴性结果。残留消毒剂的去除，可排除残留消毒剂对微生物的抑制作用，从而使试验获得正确结果。

本试验目的是验证通过滤膜过滤和冲洗的方法，可有效的去除消毒体系中的残留消毒剂，且不影响试验菌的生长数量，使消毒剂显示出真正的杀菌效果。

2.2. 试验仪器及试剂

2.2.1.仪器：生物安全柜，灭菌处理后的镊子、限度仪、微孔滤膜（孔径为0.45μ）、移液管，漩涡震荡器、电热恒温水槽。

2.2.2.试剂：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，0.9%无菌氯化钠溶液。

2.3.菌种

2.3.1.试验菌种选择

同一消毒剂对多种微生物进行杀灭试验时，所用过滤冲洗去除法应按微生物种类分别进行鉴定试验，不得互相取代。对细菌繁殖体的试验，可在大肠埃希菌[CMCC（B）44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]中任选其一进行试验即可；对真菌的试验可选择白色念珠菌 [CMCC(B)98 001]或黑曲霉 [CMCC(B)98 003]之一进行试验即可。

2.3.2.使用的菌种和编号

本方案选择如下菌种进行过滤冲洗法去除残留消毒剂试验：

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44 102]  代表细菌

白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(B)98 001]    代表真菌

2.3.3.菌液制备

菌液用等量0.9%氯化钠溶液稀释成2×10cfu/ml～3×10²cfu/ml，作为实验菌悬液。制备方法及相关要求参见：1.2。

2.4.试验操作

          分别针对使用的不同菌种进行如下试验分组（见下表）：

组号	分组方法	目的
第一组	（菌悬液 + 水）＋过滤冲洗处理 → 培养	观察除消毒剂处理是否影响实验菌的生长数量。
第二组	菌悬液→过滤+过滤冲洗 → 培养	过滤作用的影响
第三组	稀释剂+消毒剂→过滤+冲洗过滤+菌悬液 →过滤+冲洗过滤→培养	消毒剂对过滤冲洗法的影响

2.4.1.第1组——吸取1.0ml实验菌悬液于试管内， 加入4.0ml无菌注射用水，混匀。 取 1.0ml加入到过滤器中，然后加入100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（预先置 20℃±1℃ 水浴中 5min ）作冲洗过滤处理，然后直接将滤膜有菌面朝上贴于平板表面，倒置于规定温度培养（真菌于23-28℃培养5天，细菌于30-35℃培养3天），计数菌落数。

2.4.2.第2组——吸取0.2ml实验菌悬液直接加入到过滤器中，然后加入100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（预先置 20℃±1℃ 水浴中 5min ）于过滤器中，做第1次冲洗过滤处理，再加入100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液做第2次冲洗过滤处理，之后再加入100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液做第3次冲洗过滤处理,最后将滤膜有菌面朝上贴于平板表面，倒置于规定温度培养（真菌于23-28℃培养5天，细菌于30-35℃培养3天），计数菌落数。

2.4.3.第3组——吸取4.0ml消毒剂于试管中，加入1ml0.9%氯化钠溶液，混匀，取 1.0ml加入到过滤器中，加入100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（预先置 20℃±1℃ 水浴中 5min ）做第1次冲洗过滤处理，再加入100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液做第2次冲洗过滤处理,冲洗后吸取0.2ml实验菌悬液直接加入到过滤器中, 再加入100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液做第3次冲洗过滤处理,然后将滤膜有菌面朝上贴于平板表面，倒置于规定温度培养（真菌于23-28℃培养5天，细菌于30-35℃培养3天），计数菌落数。

2.5.结果判断

试验结果符合以下全部条件，则本方法可判适合去除该消毒剂残留:

2.5.1.第1、2和3组测定的结果，按以下公式计算（其结果应小于≤15%）：

组间菌落数误差率=	（3组间菌落平均数-各组菌落数）的绝对值之和	100%
	3×三组间菌落平均数

2.5.2.连续3次试验取得合格评价。

2.6.注意事项

2.6.1.严守无菌操作，保持试验用液和器材的无菌，注意更换吸管，以防止沾染影响试验的准确性。

3.细菌繁殖体定量杀灭试验

3.1.目的

验证在该消毒剂指定的最低浓度与最短作用时间内，该消毒剂能发挥有效的杀菌效力（针对细菌）。

3.2.试验用仪器及试剂

仪器：生物安全柜，移液管，一次性平皿。

3.3.菌种

3.3.1.菌种的选择要求

以金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体革兰氏阳性菌的代表、大肠埃希菌作为细菌繁殖体中革兰氏阴性菌的代表、铜绿假单胞菌作为医院感染中最常分离的细菌繁殖体的代表、白色念珠菌作为空气中细菌的代表。

本方案选择大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌及金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体定量杀灭试验用试验菌。

3.3.2.使用的菌种和编号

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44 102]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10104]

生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC(B) 64 941]

3.3.3.菌液制备

菌液用等量0.9%氯化钠溶液稀释成使其浓度为2×10cfu/ml～3×10²cfu/ml，作为实验菌悬液。制备方法及相关要求参见：1.2.。

3.4.试验操作

3.4.1.消毒液配制：按照《清洁剂、消毒剂管理规程编号SMP-PM-00001》要求配制消毒液。无特殊说明者，一律使用无菌注射用水配制，配制的浓度为待测浓度1.25倍（例如要评价的消毒液浓度为200mg/L，则应配制250 mg/L），置20℃±1℃ 水浴备用。

3.4.2.取消毒试验用无菌大试管，首先分别加入0.5ml试验用菌悬液，再各加入0.5ml0.9%氯化钠溶液，混匀，置 20℃±1℃ 水浴中 5min后，用无菌吸管吸取上述浓度消毒液 4.0ml 注入其中，迅速混匀并立即记时。

3.4.3.待实验菌与消毒剂相互作用至说明书指定最短作用时间，分别吸取0.5ml实验菌与消毒剂混合液各加于4.5ml0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，立即取1ml样液按经验证的过滤冲洗法去除残留消毒剂。

3.4.4.然后直接将滤膜有菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板表面，放置在35-37℃培养箱中培养3天，计数菌落数。如滤膜上生长的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再用过滤冲洗法去除残留消毒剂后进行活菌培养计数。

3.4.5.同时用灭菌注射用水代替消毒液，进行平行试验，作为阳性对照。

3.4.6.阴性对照组,采用直接接种法，观察试验用相关溶液（0.9%无菌氯化钠、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、无菌注射用水等）和培养基有无污染。

3.4.7.所有试验样本均在 30-35℃ 培养箱中培养，对细菌繁殖体培养3天 观察最终结果。

3.4.8.计算各组的活菌浓度（cfu/ml），并计算出各消毒液对不同细菌繁殖体的杀灭率。

杀灭率=【1-（试验组活菌数-阴性对照组活菌数）/(对照组平均活菌数*N-阴性对照组活菌数)】×100%

N——试验组用菌液稀释级/对照组用菌液稀释级

计算杀灭率时，取5位有效数字，重复3次试验。式中N(一般为100)。例如：取金黄色葡萄球菌10^-6稀释级做为对照组，则试验组取对照组10⁴菌浓的稀释级，即10^-2。按上述试验进行，取0.5ml10^-2的菌液与消毒液混合后菌液浓度变为10^-3稀释级，作用一段时间后，从上述混合液中取0.5ml于4.5ml生理盐水中，即再次进行了10倍稀释，此时的菌液稀释级变为10^-4。较对照组菌液稀释级高10²单位。故计算回收率时，对照组菌液应乘以100。

标准规定：试验杀灭对数值应≥3.00，换算成杀灭率应≥99.9%。

3.5.注意事项

3.5.1.在杀菌试验中，每次均应设置阳性对照。

3.5.2.试验中所使用的稀释液、冲洗液和培养基等，各批次均应进行无菌检查，发现有菌生长，则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做。

4.真菌杀灭试验

4.1.目的

验证在该消毒剂指定的最低浓度与最短作用时间内，该消毒剂能发挥有效的杀菌效力（针对真菌）。

4.2.试验用仪器及试剂

4.2.1.仪器：生物安全柜，移液管，一次性平皿。

4.3.菌种

4.3.1.菌种的选择要求

以白色念珠菌和黑曲霉作为致病性真菌的代表。根据消毒剂特定用途或试验特殊需要对以上菌种进行选择。

4.3.2.使用的菌种和编号

黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(B)98 003]

白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(B)98 001]

4.3.3.菌液制备

菌液用等量0.9%氯化钠溶液稀释成使其浓度为2×10cfu/ml～3×10²cfu/ml，作为实验菌悬液。制备方法及相关要求参见：1.2。

4.4.试验操作

4.4.1. 消毒液配制：按照《清洁剂、消毒剂管理规程编号SMP-PM-00001》要求配制消毒液。无特殊说明者，一律使用无菌注射用水配制，配制的浓度为待测浓度1.25倍（例如要评价的消毒液浓度为200mg/L，则应配制250 mg/L），置20℃±1℃ 水浴备用。

4.4.2.取消毒试验用无菌大试管，首先分别加入0.5ml试验用菌悬液，再各加入0.5ml0.9%氯化钠溶液，混匀，置 20℃±1℃ 水浴中 5min后，用无菌吸管吸取上述浓度消毒液 4.0ml 注入其中，迅速混匀并立即记时。

4.4.3.待实验菌与消毒剂相互作用至指定最短作用时间，分别吸取0.5ml实验菌与消毒剂混合液各加于4.5ml0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，立即取1ml样液按经验证的过滤冲洗法去除残留消毒剂。

4.4.4.然后直接将滤膜有菌面朝上贴于玫瑰红钠琼脂培养基平板表面，放置在23-28℃培养箱中培养5天，计数菌落数。如滤膜上生长的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再用过滤冲洗法去除残留消毒剂后进行活菌培养计数。

4.4.5.同时用灭菌注射用水代替消毒液，进行平行试验，作为阳性对照。

4.4.6.阴性对照组,采用直接接种法，观察试验用相关溶液（0.9%无菌氯化钠、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、灭菌注射水等）和培养基有无污染。

4.4.7.计算各组的活菌浓度（cfu/ml），然后按下式计算杀灭率:

杀灭率=【1-（试验组活菌数-阴性对照组活菌数）/(对照组平均活菌数*N-阴性对照组活菌数)】×100%

计算杀灭率时，取5位有效数字，重复3次试验。

标准规定：试验杀灭对数值应≥3.00，换算成杀灭率应≥99.9%。

4.5.注意事项

同2.6。

5.验证次数

需重复验证3次细菌定量杀灭试验和真菌杀灭试验。

6.消毒剂有效期验证试验

6.1.目的

通过该试验，确定消毒剂在有效期内稳定，并且消毒效力不会变化，符合要求。

6.2.试验操作

6.2.1.配制4%过氧化氢溶液，操作与储存执行《清洁剂、消毒剂管理规程SMP-PM-00001》。

7.2.2.在消毒剂储存的第7天取样试验。试验操作同3.细菌繁殖体定量杀灭试验和4.真菌杀灭试验。

7.2.3. 计算各组的活菌浓度（cfu/ml），并换算为对数值（N），然后按下式计算杀灭率:

杀灭率=【1-（试验组活菌数-阴性对照组活菌数）/(对照组平均活菌数*N-阴性对照组活菌数)】×100%

计算杀灭率时，取5位有效数字，重复3次试验。

九.验证数据及评估

1. QC化验员根据验证方案进行试验，并填写记录，见附表。

2.验证小组对验证数据及结论进行评估。

十.偏差及异常情况处理

1.在验证过程中，应严格按照仪器标准操作规程进行操作，出现异常时，按照仪器标准操作程序进行故障排除后重新进行试验。

2.验证过程中产生任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《偏差管理规程SMP-QA-00018》进行处理并如实记录。并给出合理的偏差处理措施，并通知QA，记录备案，并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪。

3.在验证过程中发生的变更，必须按照《变更控制规程SMP-QA-00015》进行处理，并填写相应记录。

十一.确认评价和建议

见附表6。

十二.再验证及周期

长期有效，当发生重大变更时进行再验证。

十三.验证文件归档

验证方案归档至品质保证部；验证完成后，验证报告和验证记录一同归档至品质保证部。

十四.附表

附表编号	附表名称
附表1	相关文件确认记录
附表2	验证前确认记录
附表3	培训记录表
附表4	过滤冲洗法去除残留消毒剂试验记录
附表5	微生物杀灭试验记录
附表6	验证评价和建议
附表7	偏差处理

附表1：相关文件确认记录

文件编号	文件名称		是否为现行版本	文件存放地点
SOP-QC-10040	sartorius三联式微生物限度检测系统标准操作规程		□ 是  □否
SOP-QC-10003	Thermo Scientific 1300型生物安全柜标准操作规程		□ 是  □否
SOP-QC-10045	SSW-600-2S型电热恒温水槽标准操作规程		□ 是  □否
SMP-QC-00014	菌种管理规程		□ 是  □否
SMP-QC-00017	培养基、稀释液、冲洗液管理规程		□ 是  □否
SMP-VM-00001	验证管理规程		□ 是  □否
SMP-QA-00001	文件管理规程		□ 是  □否
SOP-QC-10032	LRH-250型生化培养箱标准操作规程		□ 是  □否
SOP-QC-10033	MJ-250B型霉菌培养箱标准操作规程		□ 是  □否
SOP-QC-10034	SPX-150B霉菌培养箱标准操作规程		□ 是  □否
SOP-QC-10035	SPX-250B生化培养箱标准操作规程		□ 是  □否
结论：□ 符合规定  □不符合规定
确认人：                   年      月      日		复核人：                   年      月      日

 

 

 

附表2：验证前确认记录

检验、计量仪器设备量具确认
仪器名称		设备编号			确认日期		有效期至
生物安全柜
电热恒温水槽
LRH-250型生化培养箱
MJ-250B型霉菌培养箱
SPX-150B霉菌培养箱
SPX-250B生化培养箱
JJ1000电子天平
确认人：                  年   月   日			复核人：                         年   月   日
菌种、培养基确认
名称	编号			来源		有效期至
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
硫乙醇酸盐流体培养基
改良马丁培养基
营养肉汤培养基
改良马丁琼脂培养基
0.1%蛋白胨缓冲液
0.9%氯化钠溶液
确认人：                         年   月   日			复核人：                         年   月   日

 

 

附表3：培训记录表

时    间				授 课 人
培训内容	4%过氧化氢消毒效力考察方案
培  训  对  象
结论：
检查人：                     年  月  日				复核人：                     年  月  日

 

 

 

附表4：过滤冲洗法去除残留消毒剂试验记录

过滤冲洗法去除残留消毒剂试验记录
菌悬液	大肠埃希菌		白色念珠菌		验证日期
编  号
4%过氧化氢	大肠埃希菌		白色念珠菌
第一组
第二组
第三组
组间菌落误差率	细菌：	真菌：	标准规定	≤15%
结  论
检测人/日期：                             复核人/日期：

 

 

 

 

 

 

附表5：微生物杀灭试验记录

微生物杀灭试验记录

消毒剂名称：

验证时间：

菌种名称

金黄色葡萄球菌

大肠埃希菌

铜绿假单胞菌

生孢梭菌

白色念珠菌

黑曲霉

杀灭率

菌液编号

试验次数

1

2

3

均值

菌液稀释级

金黄色葡萄球菌

阳性对照组菌落计数

1

大肠埃希菌

2

铜绿假单胞菌

3

生孢梭菌

平均

白色念珠菌

黑曲霉

试验组菌落计数

验证用试剂/试液阴性对照

试验次数 （菌液稀释级）

铜绿假单胞菌（  ）

金黄色葡萄球菌（  ）

生孢梭菌 （  ）

大肠埃希菌 （  ）

白色念珠菌 （  ）

黑曲霉 （  ）

试剂/试液名称

细菌

霉菌及 酵母菌

1

灭菌注射用水

2

0.9%氯化钠溶液

3

pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液

检测人/日期：                                                                  复核人/日期：