伊红美蓝

[所属分类:公司新闻] [发布时间:2021-3-29] [发布人: ] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

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一种用于细胞染色的染料，又称瑞氏染料，是碱性染料美蓝(Methylene blue)和酸性染料黄色伊红(Eosin Y)的合称。伊红美蓝染料染色称为瑞氏(Wright's stain;美蓝-伊红Y)染色。

用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液，或称伊红美蓝染液。

简介

一种用于细胞染色的染料，又称瑞氏染料，是碱性染料美蓝(Methvlem blue)和酸性染料黄色伊红(Eostm Y)的合称。伊红美蓝染料染色称为瑞氏(Wright's staim;美蓝-伊红Y)染色。

用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液，或称伊红美蓝染液。

成分分析

伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用:

1. 甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲 醇

ME(瑞氏染料)----→M+ + E-

在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

2. 甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

配制

瑞氏染料

瑞氏染料 830mg或1g

甲醇(AR) 500ml或600ml

○先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显"一面镜"光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶)，再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

缓冲液

●缓冲液作用:

○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在***~6.8，

○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

●缓冲液配制(pH6.4~6.8，弱酸性):

配方1 :1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml

配方2 :1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml

H2O(新鲜) 加至1000ml

置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。

培养基

简介

伊红美蓝培养基(eosin-methylene blue medium,简称EMB medium)，一般用于检测大肠杆菌。

原理

伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。

常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。

鉴定步骤

用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌

步骤如下:

①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。

③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。

④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18~24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。

⑤将菌落接种于斜面培养基上(由营养琼脂培养基制成)。

配置方法

配方:

蛋白胨 10g

乳糖 10g

磷酸氢二钾 2g

琼脂 20~30g

蒸馏水 1000ml

2%伊红水溶液 20ml

0.5 %美蓝水溶液 13ml

储备培养基的制备:

先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

制法:

将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。