支原体

[所属分类:公司新闻] [发布时间:2021-3-30] [发布人: ] [阅读次数:] [返回]

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支原体是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具有细胞壁的原核微生物，能在无生命的人工培养基上生长繁殖，直径50-300nm，能通过细菌滤器。过去曾称之为类胸膜肺炎微生物（pleuropneumonia-like organism，PPLO）。1967年正式命名为支原体。

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。

内容简介

支原体是1898年Nocard等发现的一种类似细菌但不具有胞壁的原核微生物，能在无生命的人工培养基上生长繁殖，直径50-300nm，能通过细菌滤器。过去曾称之为类胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organism，PPLO)，1967年正式命名为支原体。

支原体(mycoplasma):又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。基因数量为480。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体)。

结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体的基因组多为双链DNA，散布于整个细胞内没有形成的核区或拟核。这种细胞内含有DNA、RNA和多种蛋白质，包括上百种酶。支原体可以在特殊的培养基上接种生长，用此法配合临床进行诊断。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种，约有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上两种支原体引起的，是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。在成年人的泌尿生殖道中分解尿素支原体和人型支原体感染率主要与性活动有关，也就是说，与性交次数的多少、性交对象的数量有关，不管男女两性都是如此。据统计女性的支原体感染率更高些，说明女性的生殖道比男性生殖道更易生长支原体。另外，分解尿素支原体的感染率要比人型支原体的感染率为高。

特征

形态与结构

支原体的大小为0.1~0.3um，可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小(直径0.1~1.0mm)，在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。细胞膜含甾醇，比其他原核生物的膜更坚韧。凡能作用于胆固醇的物质(如二性霉素B、皂素等)均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。

支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小(仅有大肠杆菌的五分之一)，合成与代谢很有限。 

肺炎支原体的一端有一种特殊的末端结构(terminal structure)，能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面，与致病性有关。

生化反应与分型

一般能分解葡萄糖的支原体则不能利用精氨酸，能利用精氨酸的则不能分解葡萄糖，据此可将支原体分为两类。解脲支原体不能利用葡萄糖或精氨酸，但可利用尿素作能源。

各种支原体都有特异的表面抗原结构，很少有交叉反应，具有型特异性。应用生长抑制试验(Growth inhibition test,GIT)、代谢抑制试验(Metabolic inhibition test,MIT)等可鉴定支原抗原，进行分型。

它广泛分布于自然界，有80余种。与人类有关的支原体有肺炎支原体(M-pneumonie，Mp)、人型支原体(UU 分解尿素支原体)和生殖器支原体(M.genitalium，MG)等。

肺炎支原体引起肺炎。现已从人类泌尿生殖道分离出来7种支原体，其中分离率较高而与泌尿生殖道疾病有关，是解脲支原体，其次是人型支原体。人型支原体(M.humenis，MH)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum，UU)和生殖器支原体(M.genitalium，MG)都会引起泌尿生殖道感染。

广义上讲，L型细菌是细菌自发突变或在抗生素、溶菌酶等作用下变成的一种细胞壁缺陷型菌株，其许多特性与支原体相似;严格地讲，L型细菌应专指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性状稳定的细胞壁缺损菌株，而经人工方法去壁后形成的缺壁细胞分别称为原生质体(彻底除尽)和球状体(部分去除)。

 

支原体与L型细菌的区别

支原体

自然界中广泛存在绝大多数生长需胆固醇

在遗传上与细菌无关，且无论在什么条件下也不能变成细菌

菌落较小，0.1~0.3mm

L型细菌 

自然界中很少存在生长不一定需胆固醇

在遗传上与原菌相关，并可在诱导因素去除后回复为原菌

菌落稍大，0.5~1.0mm

肺炎支原体

肺炎支原体(M.Pneumonia)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2~3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。

肺炎支原体的致病首先通过其顶端结构粘附在宿主细胞表面，并伸出微管插入胞内吸取营养、损伤细胞膜，继而释放出核酸酶、过氧化氢等代谢产生引起细胞的溶解、上皮细胞的肿胀与坏死。诱发机体产生的抗体也可能参与了上述病理损伤。呼吸道分泌的SlgA对再感染有一定防御作用，但不够牢固。

肺炎支原体的诊断方法主要依靠分离培养和血清学试验。标本可采可疑病人的痰或咽试子，接种于含血清或酵母浸膏的琼脂培养基。5~10天后观察有无直径30~100um的圆形房顶样菌落。多次传代后可变为典型的"荷包蛋"样菌落，并能吸附多种动物红细胞和气管上皮细胞、HeLa细胞等，且此类吸附可被特异性抗体所抑制。分离的支原体经形态、溶血与生化反应作初步鉴定后需进一步用特异性抗血清作生长抑制试验和代谢抑制试验。用患者血清与支原体脂质抗原作补体结合试验，恢复期较急性期效价高4倍以上具有诊断价值。亦可用间接免疫荧光试验、间接血凝ELISA检测标本。另外，有1/3~3/4患者的血清可与人O型红细胞在4℃时有非特异性凝集(称为"冷凝集试验")，37℃时消失，患病一周时达到高峰。此方法简便，有助于诊断。

抵抗力

支原体对热的抵抗力与细菌相似。对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感，但含PHMB杀菌成分的洁阴洗液、红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支原体的作用。

致病性免疫性

支原体不侵入机体组织与血液，而是在呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞粘附并定居后，通过不同机制引起细胞损伤，如获取细胞膜上的脂质与胆固醇造成膜的损伤，释放神经(外)毒素、磷酸酶及过氧化氢等。

巨噬细胞、lgG 及 lgM 对支原体均有一定的杀伤作用。呼吸道粘膜产生的SlgA抗体已证明有阻止支原体吸附的作用。在儿童中，致敏淋巴细胞可增强机体对肺炎支原体的抵抗力。

培养

要求

营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10~20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.8~8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲支原体最适pH6.0~6.5。

大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2~3天出现典型的"荷包蛋样"菌落:圆形(直径10~16um)，核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。

繁殖方式

繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。

细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。

污染的来源

支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如β-内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。 支原体有时被称为类菌质体。无细胞壁，多呈不规则球状、长丝状，可分枝，营寄生共生或腐生。一般侵害对象为动植物，可造成多种疾病。

支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰氏染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长。用培养基培养，营养要求比细菌高。由于它没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感，但红霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、氯霉素等作用于核蛋白体的抗生素，可抑制或影响支原体的蛋白质合成，有杀伤支原体作用，支原体对热抵抗力差，通常55℃经15分钟处理可使之灭活。石碳酸，来苏儿易将其杀死。在培养基中置入脲素并以硫酸锰作指示剂极易将人型支原体与其他支原体作出鉴别。

标本

标本采集

男性:

用无菌棉拭子插入尿道约2cm处旋转，静止数秒钟后取材。

女性:

抹去宫颈口粘液，用无菌拭子插入宫颈管l-2cm旋转取材。

尚可用前列腺液、精液、尿液离心沉淀物作标本。

接种

将标本洗入Uu或Mh液体培养基，或用滤菌器过滤接种。

诊断

临床诊断

有不洁性交、接触传染史，有尿道、阴道分泌物及排尿灼痛表现者而又排除其他病原体感染的可能性，取尿道或宫颈分泌物涂片，可作初步诊断。

实验室诊断

1.支原体培养:

a.采集标本，一般为泌尿生殖试子或刷片，少数取前列腺液，精液、关节液，或取输卵管，直肠活检物，来用初段尿标本离心物，以取代尿道拭子。拭子取材时，将拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。该方法容易造成尿道损伤及继发感染。用时须慎重。女性则需先清洁宫颈鳞状与柱状上皮结合部，用细胞刷收集宫颈标本，能增加感染细胞的数量，较棉拭子敏感性高。

b.常用培养基为牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鲜酵母浸液，10-20%动物血清及0.5%氯化钠，还可加葡萄糖和精氨酸以促进MH和MG生长，加入尿素以供UU代谢，适量加青霉素抑制杂菌。

2.血清学鉴定法:最常用的是琼脂扩散法，即将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪一种能抑制支原体生长。也可用琼脂表面的菌落作荧光抗体染色法，用落射荧光显微镜观察，此法的优点是可以利用最初生长在琼脂表面上的菌落而不必将支原体传代。

血清学诊断试验:酶联免疫吸附试验(ELISA)敏感性高:微量免疫荧光法(MIF)具有快速特点。

3.基因诊断:利用DNA探针对支原体诊断其敏感性稍差，但特异性高，用聚合酶链反应(PCR)，敏感性、特异性均高。

诊疗原则

1. 具有比较典型的感染过程，无论有无症状(因为有大约一半属于症状不明显者，等到明显时可能已造成损害了)检查衣原体阳性者，不分男女都需要治疗;

2. 一些根本无尿道炎症状的人偶然体检发现，或是一些女性怀孕后发现支原体感染，但局部检查没有炎症表现者，多属于携带者可能性比较大，是否治疗有一定分歧。对于普通人，可不需特别治疗，或正规使用抗生素后，转阴也好，不转阴也不必强求;对于孕妇而言，一般建议用药转阴，但也不必苛求。

3. 用药方面，抗生素耐药现象越来越明显，每个地区的耐药的种类和药品都不太相同，因此会有一些人用美满霉素好，有些人则喜欢用阿奇，而广东某地的研究表明，交沙霉素对解脲支原体最敏感;但正因如此，当某种抗生素被广泛使用后，其耐药的机会就大大增加了。的联合用药有时是不得已之举。

4. 经验用药一疗程后效果不显，应积极进行药敏实验。

5. 中西医结合既可较快改善症状，也能在一定程度上减少耐药，当然这种结合不是中药加西药，而是有机结合。

6.中药妇炎丸的治疗，可采用活血化瘀、健脾利湿方法来治疗支原体。