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培养基适用性检查方案——R2A琼脂

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

培养基适用性检查方案——R2A琼脂

【培养基原理】

酪蛋白水解物、蛋白胨提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，酵母浸出粉提供维生素尤其是B族维生素；葡萄糖提供碳源；氯化钠提供适宜的生理环境；硫酸镁提供重要的镁离子；丙酮酸钠与可溶性淀粉对微生物菌体有一定的修复作用；琼脂为凝固剂。此培养基没有选择性，可满足大多数微生物的生长需求。

【所需菌种】

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]

【检查方法】

平皿倾注法，同步使用对照培养基与待检培养基

【菌液制备与稀释】

挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下枯草芽孢杆菌10^-5～10^-6、铜绿假单胞菌10^-6～10^-7)

【培养基制备】

被检培养基：称取培养基18.1g于1000ml纯化水中,混悬均匀,121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，置于44.5℃水浴锅中保温，备用。

对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于无菌培养皿中，立即倾入保温至44.5℃的培养基15～20ml，摇匀。每种试验菌各做一个平行对照。

2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液，仅倾入培养基。

3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。

4. 放置片刻，待培养基凝固后，置30～35℃培养箱中培养不超过3天。

5.计数并观察菌落特征。

【计算方法】

回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。

【判定依据】

若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。

培养基适用性检查记录