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培养基适用性检查方案——硫乙醇酸盐流体培养基(FT)

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

培养基适用性检查方案——硫乙醇酸盐流体培养基(FT)

【培养基原理】

胰酪胨提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，酵母浸粉提供维生素等营养成分，葡萄糖提供碳源，氯化钠提供适宜的生理环境，L-胱氨酸与硫乙醇酸钠联合作用消除液体培养基中的渗透溶解氧，少量的琼脂粉增加培养基的粘度，一定程度上阻止氧气的渗入，刃天青为氧气指示剂，有氧环境呈红色，无氧环境无色。

【所需菌种】

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]

生孢梭菌(Clostridium sporogenes) [CMCC(B)64941]

【检查方法】

试管接种法，同步使用对照培养基与待检培养基，进行灵敏度检查。

(说明：按药典说明，该培养基若用于无菌检查，则其适用性检查不需要对照培养基)

【菌液制备与稀释】

1. 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌

挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下金黄色葡萄球菌为10^-6～10^-7、铜绿假单胞菌10^-6～10^-7)

2. 生孢梭菌

挑取四代以内（含四代）的生孢梭菌鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，经30～35℃培养18～24h；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-6～10^-7)

【培养基制备】

被检培养基：称取培养基29.25g于1000ml纯化水中,持续煮沸1分钟驱除溶解氧，分装试管12ml/支，121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后迅速冷却，备用。

另准备胰酪大豆胨琼脂培养基和哥伦比亚琼脂培养基(可不添加庆大霉素)进行稀释菌悬液计数，培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。

2. 培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。

3. 接种量计数：步骤1中的平皿中，金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，生孢梭菌倾注哥伦比亚琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。

4. 所有硫乙醇酸盐流体培养基及倾注的胰酪大豆胨琼脂培养基平板置30～35℃培养箱中培养3天，倾注的哥伦比亚琼脂培养基平板置30～35℃厌氧培养3天。

5.观察试管生长状况并计数平板菌落数目。

【观察记录方法】

硫乙醇酸盐流体培养基试管培养基:铜绿假单胞菌为需氧菌，生长于试管有氧区；金黄色葡萄球菌初期成串珠状生长，后期培养基呈浑浊状态；生孢梭菌为厌氧菌，仅生长于厌氧区）。

接种量计数＝计数培养基平均菌落数—计数培养基空白组菌落数）

【判定依据】

接种量在<100CFU,加菌的培养基试管生长良好，空白管无菌生长，则判定合格。

培养基适用性检查记录

培养基名称

硫乙醇酸盐流体培养基

批号

20151029

培养基编号

M5601B

包装规格

250g/瓶

供货单位

山东拓普生物工程有限公司

检查日期

2015年11月02日

对照培养基批号

201510

报告日期

2015年11月05日

对照培养基来源

中国食品药品检定研究院

检验依据

中国药典2015版

检验操作程序：****************************

培养条件

温度：30-35℃ 时间：72 h 生孢梭菌计数平板厌氧培养

试验菌

代数

稀释级

计数培养基

cfu/皿

被检培养基

结论

金黄色葡萄球菌

CMCC(B)26003

10^-7

空白

均值

生长良好

空白

合格

生长良好

未生长

铜绿假单胞菌

CMCC(B)10104

10^-7

空白

均值

生长良好

空白

合格

生长良好

未生长

生孢梭菌CMCC(B)64941

10^-6

空白

均值

生长良好

空白

合格

生长良好

未生长

结论

被检培养基适用性检查 合格 不合格

(注：若计数培养基或被检培养基空白有细菌生长，则本次检查无效)

检查人

******

日期

2015年11月05日

复核人

******

日期

2015年11月05日

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