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培养基适用性检查方案——胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)
山东拓普生物工程有限公司
Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd
说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目
培养基适用性检查方案——胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)
【培养基原理】
胰酪胨、大豆木瓜蛋白酶水解物提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，氯化钠提供适宜的生理环境，琼脂为凝固剂。此培养基没有选择性，可满足大多数微生物的生长需求。
【所需菌种】
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]
白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]
黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]
【检查方法】
平皿倾注法，同步使用对照培养基与待检培养基
【菌液制备与稀释】
1. 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌
挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下金黄色葡萄球菌为10-6～10-7、枯草芽孢杆菌10-5～10-6、铜绿假单胞菌10-6～10-7)
2. 白色念珠菌
挑取四代以内（含四代）的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养2～3天；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-6～10-7)
3. 黑曲霉
挑取四代以内（含四代）的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中，经20～25℃培养5～7天（生长大量黑色菌丝）,加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-5～10-6，因菌丝数量不同，可能有误差)
【培养基制备】
被检培养基：称取培养基12.0g于300ml纯化水中,混悬均匀,121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，置于44.5℃水浴锅中保温，备用。
对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。
【实验方法】
1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于无菌培养皿中，立即倾入保温至44.5℃的培养基15～20ml，摇匀。每种试验菌各做一个平行对照。
2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液，仅倾入培养基。
3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。
4. 放置片刻，待培养基凝固后，置30～35℃培养箱中培养，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌培养不超过3天，黑曲霉与白色念珠菌培养不超过5天。
(注意：黑曲霉如培养时间过长，则易导致菌丝过多而无法计数，可在培养3天后初次进行计数)
5.计数并观察菌落特征。
【计算方法】
回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。
【判定依据】
若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。
培养基适用性检查记录
|
培养基名称 |
胰酪大豆胨琼脂培养基 |
批 号 |
20151029 |
||||||||
|
培养基编号 |
M0002B |
包装规格 |
250g/瓶 |
||||||||
|
供货单位 |
山东拓普生物工程有限公司 |
检查日期 |
2015年11月02日 |
||||||||
|
对照培养基批号 |
201510 |
报告日期 |
2015年11月05日 |
||||||||
|
对照培养基来源 |
中国食品药品检定研究院 |
检验依据 |
中国药典2015版 |
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|
检验操作程序：*********************************** |
|||||||||||
|
试验菌 |
代数 |
稀释级 |
培养条件 |
对照培养基 cfu/皿 |
被检培养基 cfu/皿 |
生长率 |
形态与大小 |
||||
|
金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 |
4 |
10-7 |
温度： 30-35 ℃
时间： 48 h |
75 |
均值
79 |
72 |
均值
77 |
0.97 |
一致 |
||
|
83 |
81 |
||||||||||
|
枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 |
4 |
10-6 |
44 |
均值
48 |
49 |
均值
51 |
1.06 |
一致 |
|||
|
54 |
53 |
||||||||||
|
铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104 |
4 |
10-7 |
75 |
均值
79 |
72 |
均值
77 |
0.97 |
一致 |
|||
|
83 |
81 |
||||||||||
|
白色念珠菌 CMCC(F)98001 |
4 |
10-7 |
温度： 30-35℃
时间： 72 h |
44 |
均值
48 |
49 |
均值
51 |
1.06 |
一致 |
||
|
54 |
53 |
||||||||||
|
黑曲霉 CMCC(F)98003 |
4 |
10-5 |
75 |
均值
79 |
72 |
均值
77 |
0.97 |
一致 |
|||
|
83 |
81 |
||||||||||
|
结论 |
被检培养基适用性检查 合格 不合格 |
||||||||||
|
检查人 |
****** |
日期 |
2015年11月05日 |
||||||||
|
复核人 |
****** |
日期 |
2015年11月05日 |
||||||||
