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|
- 1. S0013 - 10%三氯化铁溶液
- 2. S0001 - Kovacs氏靛基质试剂/柯凡克试剂 Kovacs Indole Regent
- 3. S0025 - 班氏试剂/Benedict氏定性试剂
- 4. S0005 - V-P试剂/VP试剂 Voges-Proskauer reagents
- 5. C0116 - 安瓿瓶试验盒
山东拓普生物工程有限公司
Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd
肠杆菌科细菌生化鉴定套装使用说明书
【产品名称】T141 肠杆菌科细菌生化鉴定套装15种(第二代15e)
【包装规格】17支/套 1套/盒 10套/包(10盒)
【产品用途】用于肠杆菌科细菌生化鉴定(应满足革兰氏染色阴性,氧化酶阴性,葡萄糖发酵阳性)
【贮藏条件】2-8℃避光保存1年
【使用方法】1、从纯化平板上挑取待检菌落于生理盐水中,制备成约0.5麦氏浊度的菌悬液;2、使用配套砂轮划割安瓿瓶蓝点正下方瓶颈处,背向蓝点掰开安瓿瓶(戴手套操作),放入安瓿瓶试验盒中;3、移液器移取100ul菌悬液加至安瓿瓶中(斜面生化管需沿斜面滴加菌悬液),葡萄糖酸盐氧化实验、半固体琼脂、葡萄糖半固体发酵管请单独按照注意事项接种操作;4、36±1℃培养,具体培养时间见下表,出现阳性结果后即可停止培养;5、判断实验结果,依照说明书中示例的计算方法将鉴定结果填入鉴定表中,计算得到鉴定编码;6、查编码册,得到鉴定结果,如您无编码册,可将编码告知我司代为查询。
【重要声明】使用本品时,并不是所有的编码均有鉴定结果。这是因为有些生化反应模式不可能出现或目前尚未认识有这样的菌种。在设计本编码时,以删繁就简为原则,在项目的排列上以合理为最佳选择。在使用时,如发现查不到鉴定结果,可重复鉴定一次或仔细分析生化实验现象以确保判断的生化反应结果无误;如果实验没有问题,可结合16SRNA等鉴定方法进行综合判断。
【套装组成及判断方法】
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编号 |
产品名称 |
培养时间 |
阳性结果 |
阴性结果 |
第 1 组 |
T157 |
硫化氢试验培养基(不含琼脂) |
1-2天 |
黑色 |
不变黑 |
T118 |
苯丙氨酸培养基 |
1-2天 |
绿色(见注意事项1) |
其它颜色 |
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T142 |
葡萄糖酸盐氧化实验 |
1-2天 |
见注意事项2 |
||
第 2 组 |
T003 |
蛋白胨水(色氨酸肉汤) |
1-2天 |
红色(见注意事项3) |
无红色 |
T001 |
缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR-VP) |
1-2天 |
红色(见注意事项4) |
无红色 |
|
T013 |
西蒙氏柠檬酸盐琼脂 |
1-4天 |
蓝色 |
绿色 |
|
第 3 组 |
T005 |
尿素琼脂斜面 |
1-2天 |
深红色或紫红色 |
黄色或不变色(浅红色) |
T004 |
半固体琼脂 |
1-2天 |
扩散生长(见注意事项5) |
不扩散生长 |
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T024 |
葡萄糖半固体发酵管 |
1-2天 |
黄色,产气(见注意事项6) |
不产气 |
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第 4 组 |
T008 |
赖氨酸脱羧酶肉汤 |
1-2天 |
对照管黄色-灰紫色 肉汤管紫色 (见注意事项7)
|
对照管黄色,肉汤管黄色 或 对照管与肉汤管均为浅灰紫色
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T012 |
鸟氨酸脱羧酶肉汤 |
1-2天 |
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T009 |
氨基酸脱羧酶对照 |
1-2天 |
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T011 |
无菌液体石蜡 |
1-2天 |
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T015 |
棉子糖发酵管 |
1-2天 |
黄绿色-黄色 |
绿色或蓝色 |
|
第 5 组 |
T014 |
山梨醇发酵管 |
1-2天 |
黄绿色-黄色 |
绿色或蓝色 |
T121 |
侧金盏花醇发酵管 |
1-2天 |
黄绿色-黄色 |
绿色或蓝色 |
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T039 |
木糖发酵管 |
1-2天 |
黄绿色-黄色 |
绿色或蓝色 |
【所需配套产品】
S0013--10%三氯化铁溶液;S0025--班氏试剂;S0001--Kovacs氏靛基质试剂; S0006--甲基红试剂;
C0116--安瓿瓶试验盒
【注意事项】
1、苯丙氨酸培养基:培养结束后,取出10%三氯化铁溶液,轻轻摇匀,滴加2~3滴于培养结束的苯丙氨酸琼脂斜面,使其沿斜面流下。
2、葡萄糖酸盐氧化实验: 接种大量新鲜待测纯培养物(菌苔/菌落)于生化管中,培养后滴加班氏试剂(S0025)1ml,充分摇匀;使用镊子等夹住试验管于沸水中加热10分钟,静置15-30分钟后观察结果;出现黄色-茶色-橙红色沉淀为阳性,仍保持蓝色或蓝绿色为阴性。
3、 蛋白胨水(色氨酸肉汤)用于靛基质实验,培养结束后滴加Kovacs氏靛基质试剂(S0001)2~4滴,立即观察结果。出现红色为阳性,无红色为阴性。
4、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR-VP)用于甲基红实验:培养结束后,滴加2~3滴甲基红试剂(S0006),轻轻震荡,立即观察结果,出现红色为阳性,无红色为阴性。
5、半固体琼脂用于动力实验:使用接种针挑取菌苔直立穿刺接种,需保证接种针在培养基内直线穿刺不发生左右偏移。培养结束后观察穿刺线上细菌的生长情况,若细菌仅在穿刺线生长,则无动力;若细菌有沿穿刺线向四周扩散生长的现象,有动力。
6、葡萄糖半固体发酵管用于产气实验:使用接种针挑取菌苔直立穿刺接种。培养结束后观察结果。如琼脂内有气体或发生破裂,则为阳性反应;没有气体为阴性反应。
7、赖氨酸脱羧酶肉汤、鸟氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照三支生化管接菌后应立即覆盖200-300ul的无菌液体石蜡,然后培养。按上表结合对照管一起观察结果。本实验有时较难判断,建议于10h、20h、30h、40h左右多次观察结果,结合对照管的颜色变化进行综合判断。
8、关于培养时间的说明:培养时间为1-2天,多数细菌繁殖较快,培养1天即可;如确实无法判断细菌繁殖快慢,实际操作时可培养两天,但是建议在培养10h、20h、30h、40h左右联系观察记录实验结果。对于糖醇发酵管而言,培养过程中如出现阳性反应,即使长时间培养后,黄色等颜色变回绿色,仍应判阳性反应。
9、本品附带4页鉴定表,每页3张,共计12张,用于鉴定结果的记录。
10、应急处置:使用时应佩戴手套,如不慎与身体直接接触,应立即用水冲洗至少15分钟。
11、本品仅用于微生物检测,不用于体外诊断。
【编码示例】
1、 将判断得到的生化反应结果填入下表,阳性结果为“+”,阴性结果为“-”。
2、 单值指的是预先赋予该实验项目的数值,只有当该实验项目呈阳性反应时方可计入。
3、 将实验分成了5组,分组计算各自阳性反应对应的单值之和得到总值。
实 验 项 目 |
第1组 |
第2组 |
第3组 |
第4组 |
第5组 |
||||||||||
硫化氢 |
苯丙氨酸 |
葡萄糖酸盐 |
靛基质 |
甲基红 |
柠檬酸盐 |
尿素 |
动力 |
葡萄糖产气 |
赖氨酸 |
鸟氨酸 |
棉子糖 |
山梨醇 |
侧金盏花醇 |
木糖 |
|
结果(+/-) |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
单值 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
总值 |
1 |
5 |
1 |
5 |
7 |
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鉴定码为15157,查询编码册得到鉴定结果为:产酸克雷伯氏菌 |