血球计数板的使用方法

[所属分类:公司新闻] [发布时间:2021-3-18] [发布人: ] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

     血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具。

血球计数板 

用优质厚玻璃制成。每块计数

板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0毫米X1.0毫米=1.0平方毫米;容积为1.0平方毫米X0.1毫米=0.1立方毫米。其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域(图中浅红色区域)，每个中方格用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域(图中浅蓝色区域)，每个大方格用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局(NBS)规定，大方格每边长度允许误差为±1%。

说明:上图红色方框代表一个大方格;绿色方框代表一个中方格，两种中方格的面积不一样大;蓝色方框代表一个小方格。

基本构造

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个中方格(大方格用三线隔开)，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格(中方格之间用双线分开)，而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm，每个小方格的面积为1/400mm。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm，每个小方格的体积为1/4000mm。

使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。

使用方法

1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍)，以每小格的菌数可数为度。

2.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3.将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高)，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。

4.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5.计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格(即100小格)的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的 

菌数(即80个小格)。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图:即本格中计数细胞为3个。 

6.对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大，否则应重新操作)，按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。

7.测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

 计数公式

红细胞数(RBCs)/L=N/5×25×10×10×200

N为:五个中方格的RBC总数

N/5为:5个中方格(粉红色区域)的平均RBC数量(然后推及至中央大方格中每一个中方格RBC的数量)

N/5×25为:中央大方格RBC总数(即:0.1mm(ul)的RBC总数)

N/5×25×10为:1mm(ul)RBC总数

N/5×25×10×10为:1L的RBC总数

200为:血液的稀释倍数

公式简化后:红细胞数/L=N×5×10×稀释倍数

公式前面部分都是换算成每微升血多少该计数细胞;最后都是由微升换算到升，乘以10的6次方

(1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数

(2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度.

(3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数.若更换物镜,目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定.

构造使用

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面，刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm。

计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成

使用说明

以计数酵母菌为例

(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。

(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。

(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。

(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。

(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。

3.计算公式

(1)16格×25格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数

(2)25格x16格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数

4.血球计数板的清洁

血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。