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培养基适用性检查方案——木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基(XLD)

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

培养基适用性检查方案——木糖赖氨酸脱氧胆酸盐

琼脂培养基(XLD)

【培养基原理】

酵母浸出物提供微生物生长所需的维生素；氯化钠提供适宜的生理环境；脱氧胆酸钠可抑制多数革兰氏阳性细菌生长；木糖、乳糖和蔗糖为选择性碳源；L-赖氨酸为选择性氮源；酚红为酸碱指示剂，酸性变黄，碱性变红；硫代硫酸钠提供硫元素；枸橼酸铁铵提供铁元素；琼脂为凝固剂。

通过是否发酵糖产酸、发酵赖氨酸产碱，从而引起培养基pH下降，使菌落着上不同颜色；同时某些细菌会利用硫代硫酸钠产生硫化氢，硫化氢遇铁元素形成硫化亚铁，使菌落着黑色。硫化氢不稳定，故长时间培养后黑色容易消退。

【所需菌种】

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]

乙型副伤寒沙门氏菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)50094]

【检查项目】

促生长能力、指示能力、抑制能力（此项建议添加）

【检查方法】

平皿涂布法，同步使用对照培养基与待检培养基

【菌液制备与稀释】

1、乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌：挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每0.1ml含小于100cfu的菌悬液(稀释梯度：通常情况下为10^-6)。金黄色葡萄球菌稀释成每0.1ml含不少于100cfu的菌悬液(稀释梯度：通常情况下为10^-5)

2、大肠埃希氏菌：制备菌悬液，无需稀释，之后进行划线操作。

【培养基制备】

被检培养基：称取培养基11 g于200ml纯化水中,加热搅拌煮沸溶解1分钟，冷至50℃左右倾注平板(每皿20ml左右)

对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。

将制备好的平板做好标记，条件允许的话置于30～35℃培养箱中预置约2～4h，目的是消除琼脂表面多余的水分，以便涂布操作。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：

1.1乙型副伤寒沙门氏菌：取稀释后的菌悬液0.1ml加于预制的平板中，涂布均匀（涂布操作注意避免菌液过多的存在于平皿边缘，当涂布过程感觉平板表面比较干燥时即认为涂布完成），做2个平行对照。同时制备一个麦康凯琼脂平板，待凝固后，划线大肠埃希氏菌。

1.2金黄色葡萄球菌：取稀释后的菌悬液0.1ml加于预制的平板中，涂布均匀，做一个平板即可，用于抑制能力检查。

2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液。

3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。

4. 置30～35℃培养箱中培养18～48h。

5. 计数并观察菌落特征。

【计算方法】

回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。

【判定依据】

若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。

培养基适用性检查记录

培养基名称

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基

批号

20151029

培养基编号

M2010B

包装规格

250g/瓶

供货单位

山东拓普生物工程有限公司

检查日期

2015年11月02日

对照培养基批号

201510

报告日期

2015年11月03日

对照培养基来源

中国食品药品检定研究院

检验依据

中国药典2015版

检验操作程序：***********************************

培养条件

温度：30-35℃ 时间：24h

试验菌

代数

稀释级

计数培养基

cfu/皿

被检培养基

cfu/皿

对照培养基

生长率

抑制能力检查

金黄色葡萄球菌

CMCC(B)26003

计数

10^-7

空白

均值

910

试管

10^-6

未生长

空白

未生长

空白

未生长

未

生

长

未生长

未

生

长

促生长能力与指示能力检查

乙型副伤寒沙门氏菌

CMCC(B)50094

10^-7

均值

0.97

中心黑边缘红

大肠埃希氏菌

CMCC(B)44102

生长

良好

生长

良好

黄色菌落

结论

被检培养基适用性检查 合格 不合格

(注：空白有细菌生长，则本次检查无效)

检查人

******

日期

2015年11月03日

复核人

******

日期

2015年11月03日

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