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培养基适用性检查方案—玫瑰红钠琼脂培养基

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

培养基适用性检查方案—玫瑰红钠琼脂培养基

【培养基原理】

胨提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，葡萄糖提供碳源，磷酸二氢钾赋予培养基一定的缓冲能力，硫酸镁提供镁离子等无机元素，玫瑰红钠作为选择性抑菌剂对大肠埃希氏菌等细菌有一定的抑制能力同时使菌落着玫红色，便于观察计数，琼脂为凝固剂。

【所需菌种】

白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]

黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]

【检查方法】

涂布法，同步使用对照培养基与待检培养基，进行促生长能力和抑制能力以及指示能力的验证

【菌液制备与稀释】

1. 白色念珠菌

挑取四代以内（含四代）的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养2～3天；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每0.1ml含不大于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-5～10^-7)

2. 黑曲霉

挑取四代以内（含四代）的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中，经20～25℃培养5～7天（生长大量黑色菌丝）,加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每0.1ml含不大于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-3～10^-4，因菌丝数量不同，可能有误差)

3. 挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每0.1ml含不少于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-5)。

【培养基制备】

被检培养基：称取培养基6.1g于200ml纯化水中,混悬均匀,115℃高压灭菌30分钟或121℃灭菌15分钟,灭菌结束后摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，倾注平板，凝固，备用。

对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。

同时准备胰酪大豆胨琼脂培养基平板进行大肠埃希氏菌计数。

（注意：此处制备的平板应使用适宜的方法进行干燥，可以在30-35℃培养箱中预培养4h进行干燥）

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液0.1ml分别加于预制好的干燥过的培养基平板中，每种菌最少接种两个平板。

2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液，仅倾入培养基。

3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。

4.置20～25℃培养箱中培养不超过5天。

(注意：黑曲霉如培养时间过长，则易导致菌丝过多而无法计数，可在培养3天后初次计数)

5.计数并观察菌落特征

【计算方法】

回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。

【判定依据】

若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，同时大肠埃希氏菌应受到彻底抑制，则判定合格。

培养基适用性检查记录

培养基名称

玫瑰红钠琼脂培养基

批号

20151029

培养基编号

M4103B

包装规格

250g/瓶

供货单位

山东拓普生物工程有限公司

检查日期

2015年11月02日

对照培养基批号

201510

报告日期

2015年11月05日

对照培养基来源

中国食品药品检定研究院

检验依据

中国药典2015版

检验操作程序：***********************************

培养条件

温度：20-25℃ 时间：100h

试验菌

代数

稀释级

计数培养基

cfu/皿

被检培养基

cfu/皿

对照培养基

生长率

抑制能力检查

大肠埃希氏菌

CMCC(B)44102

计数

10^-7

空白

均值

910

试管

10^-6

未生长

空白

未生长

空白

未生长

未

生

长

未生长

未

生

长

促生长能力与指示能力检查

白色念珠菌

CMCC(F)98001

10^-7

均值

0.97

玫红色菌落

黑曲霉

CMCC(F)98003

10^-7

均值

1.06

黑色菌丝

结论

被检培养基适用性检查 合格 不合格

(注：若计数培养基或被检培养基空白有细菌生长，则本次检查无效)

检查人

******

日期

2015年11月05日

复核人

******

日期

2015年11月05日

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