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| 编号： | |
| 批号： | |
培养基适用性检查方案—麦康凯液体培养基
山东拓普生物工程有限公司
Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd
说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目
培养基适用性检查方案—麦康凯液体培养基
【培养基原理】
明胶胰酶水解物提供微生物生长所需的基本氮源，乳糖提供选择性碳源，大肠菌群等肠道非致病菌发酵乳糖会产酸，从而引起培养基pH下降；牛胆盐抑制多数革兰氏阳性细菌；溴甲酚紫为酸碱指示剂，碱性呈紫色，酸性呈黄色。
【所需菌种】
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]
乙型副伤寒沙门氏菌（Salmonella paratyphi B）[CMCC(B)50094]
【检查方法】
试管接种法，进行促生长能力检查、抑制能力检查与指示能力检查（建议添加此项）。
【菌液制备与稀释】
1、乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌
挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含不大于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-6～10-7)
2、金黄色葡萄球菌
挑取四代以内（含四代）菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含不少于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-5～10-6)
【培养基制备】
被检培养基：称取本品35.0g于1L蒸馏水或去离子水中（可按比例增加或减少配制量），微温溶解，分装试管，121℃灭菌15分钟，冷却,备用。
对照培养基：按说明制备
另准备胰酪大豆胨琼脂培养基进行稀释菌悬液计数，培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。
【实验方法】
1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。（注意：由于此处金黄色葡萄球菌菌悬液浓度稍高，建议倾注时选取下一个稀释梯度，即10-6～10-7）
2. 培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。
3. 接种量计数：步骤1中的平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。
4. 培养条件：
42～44℃培养箱中培养24～48h
【观察记录方法】
参考下述，长情况
A． 大肠埃希氏菌
——试管浑浊，变黄，有大量胆酸盐沉淀物，生长良好。
B．乙型副伤寒沙门氏菌
——试管浑浊，不变黄，仍为紫色，生长良好。
C． 金黄色葡萄球菌
——试管澄清透明，彻底抑制。
D．接种量计数＝（计数培养基平均菌落数—计数培养基空白组菌落数）*相差倍数
【判定依据】
大肠埃希氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌接种量在不大于100CFU,加菌的培养基试管生长良好且与对照培养基相似，空白管无菌生长，则判定促生长能力合格。
金黄色葡萄球菌接种量在不少于100CFU,加菌的培养基试管不生长且与对照培养基相似，空白管无菌生长，则判定抑制能力合格。
培养基适用性检查记录（示例）
|
培养基名称 |
麦康凯液体培养基 |
批 号 |
20151029 |
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|
培养基编号 |
M2055B |
包装规格 |
250g/瓶 |
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|
供货单位 |
山东拓普生物工程有限公司 |
检查日期 |
2015年11月02日 |
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|
对照培养基批号 |
201510 |
报告日期 |
2015年11月04日 |
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对照培养基来源 |
中国食品药品检定研究院 |
检验依据 |
中国药典2015版 |
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检验操作程序：*********************************** |
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培养条件 |
温度：42-44℃ 时间：30h |
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|
试验菌 |
代数 |
稀释级 |
计数培养基 cfu/皿 |
被检培养基 cfu/管 |
对照培养基 |
结论 |
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|
抑制能力检查 |
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|
金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 |
4 |
计数 |
10-7 |
89 |
空白 |
均值
91 |
试管接种量 |
|
|||||||||
|
试管 |
10-6 |
92 |
0 |
910 |
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|
|
紫色 未生长 |
空白 |
紫色 未生长 |
空白 |
合格 |
||||||||||||
|
紫色 未生长 |
紫色 未生长 |
紫色 未生长 |
紫色 未生长
|
||||||||||||||
|
促生长能力与指示能力检查 |
|
|
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|
乙型副伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50094 |
4 |
10-7 |
75 |
空白 |
均值
79 |
紫色 肉汤浑浊 |
紫色 肉汤浑浊 |
合格 |
|||||||||
|
83 |
0 |
紫色 肉汤浑浊 |
紫色 肉汤浑浊 |
||||||||||||||
|
大肠埃希氏菌 CMCC(B)44102 |
4 |
10-7 |
44 |
空白 |
均值
48 |
黄色 肉汤浑浊 |
紫色 肉汤浑浊 |
合格 |
|||||||||
|
51 |
0 |
黄色 肉汤浑浊 |
紫色 肉汤浑浊 |
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|
结论 |
被检培养基适用性检查 合格 不合格
(注：若计数培养基或被检培养基空白有细菌生长，则本次检查无效) |
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检查人 |
****** |
日期 |
2015年11月04日 |
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|
复核人 |
****** |
日期 |
2015年11月04日 |
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