培养基适用性检查方案—沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)

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山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

 

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

 

培养基适用性检查方案—沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)

 

【培养基原理】

胰酪胨、动物组织胃蛋白酶水解物提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，葡萄糖提供碳源，琼脂为凝固剂。

【所需菌种】

白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]

黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]

【检查方法】

平皿倾注法，同步使用对照培养基与待检培养基

【菌液制备与稀释】

1. 白色念珠菌

挑取四代以内（含四代）的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养2～3天；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-6～10^-7)

2. 黑曲霉

挑取四代以内（含四代）的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中，经20～25℃培养5～7天（生长大量黑色菌丝）,加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-5～10^-6，因菌丝数量不同，可能有误差)

 

【培养基制备】

   被检培养基：称取培养基13.0g于200ml纯化水中,混悬均匀,121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，置于44.5℃水浴锅中保温，备用。

   对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于无菌培养皿中，立即倾入保温至44.5℃的培养基15～20ml，摇匀。每种试验菌各做一个平行对照。

2. 培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液，仅倾入培养基。

3. 对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。

4. 放置片刻，待培养基凝固后，置20～25℃培养箱中培养不超过5天。

(注意：黑曲霉如培养时间过长，则易导致菌丝过多而无法计数，可在培养3天后初次计数)

5.计数并观察菌落特征

【计算方法】

回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。

【判定依据】

若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                       培养基适用性检查记录

 

培养基名称

沙氏葡萄糖琼脂培养基

批    号

20151029

培养基编号

M4108B

包装规格

250g/瓶

供货单位

山东拓普生物工程有限公司

检查日期

2015年11月02日

对照培养基批号

201510

报告日期

2015年11月05日

对照培养基来源

中国食品药品检定研究院

检验依据

中国药典2015版

检验操作程序：***********************************

试验菌

代数

稀释级

培养条件

对照培养基 cfu/皿

被检培养基 cfu/皿

生长率

形态与大小

白色念珠菌 CMCC(F)98001

4

10-7

温度：25℃     时间：100h

75

均值   79

72

均值   77

0.97

一致 白色

83

81

黑曲霉 CMCC(F)98003

4

10-5

44

均值   48

49

均值   51

1.06

一致 黑色菌丝

51

53

结论

被检培养基适用性检查          合格         不合格   (注：若空白有细菌生长，则本次检查无效)

检查人

******

日期

2015年11月05日

复核人

******

日期

2015年11月05日