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培养基适用性检查方案——沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)

[所属分类:技术资料] [发布时间:2018-5-21] [发布人:管理员] [阅读次数:] [返回]

山东拓普生物工程有限公司

Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd

说明：本文仅提供检查方法，如需生成文件，请自行补充其他所需项目

培养基适用性检查方案——沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)

【培养基原理】

胰酪胨、动物组织胃蛋白酶水解物提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，葡萄糖提供碳源。

此培养基在药典中主要用于白色念珠菌菌液制备和菌种保存与传代

【所需菌种】

白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]

黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]

【检查方法】

试管接种法，进行促生长能力检查。

【菌液制备与稀释】

1. 白色念珠菌

挑取四代以内（含四代）的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养2～3天；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-6～10^-7)

2. 黑曲霉

挑取四代以内（含四代）的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中，经20～25℃培养5～7天（生长大量黑色菌丝）,加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。

(稀释梯度：通常情况下为10^-5～10^-6，因菌丝数量不同，可能有误差)

【培养基制备】

被检培养基：称取培养基30.0g于1000ml纯化水中,微温溶解，分装试管，121℃高压灭菌15分钟,冷却，备用。

另准备沙氏葡萄糖琼脂培养基进行稀释菌悬液计数，培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。

【实验方法】

1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。

2. 培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。

3. 接种量计数：步骤1中的平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，同时培养基做1个空白。

4. 培养条件：

20～25℃培养白色念珠菌培养24～48h；黑曲霉培养3～5天

倾注计数用的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20～25℃培养箱中培养3～5天

【观察记录方法】

参考下述，长情况

A．白色念珠菌

——SDB试管澄清透明，底部有白色菌团。

B. 黑曲霉

——SDB试管澄清透明，有白色或黑色菌丝团生长。

C．接种量计数＝计数培养基平均菌落数—计数培养基空白组菌落数

【判定依据】

接种量在<100CFU,加菌的培养基试管生长良好且与对照培养基相似，空白管无菌生长，则判定合格。

培养基适用性检查记录

培养基名称

沙氏葡萄糖液体培养基

批号

20151029

培养基编号

M4109B

包装规格

250g/瓶

供货单位

山东拓普生物工程有限公司

检查日期

2015年11月02日

对照培养基批号

201510

报告日期

2015年11月06日

对照培养基来源

中国食品药品检定研究院

检验依据

中国药典2015版

检验操作程序：****************************

培养条件

温度： 20-25℃ 时间：白色念珠菌 48h 黑曲霉100h 计数平板100h

试验菌

代数

稀释级

计数培养基

cfu/皿

被检培养基

对照培养基

结论

白色念珠菌

CMCC(B)98001

10^-7

空白

均值

生长良好

空白

生长良好

空白

合格

生长良好

未

生

长

生长良好

未

生

长

黑曲霉

CMCC(B)98003

10^-7

空白

均值

生长良好

合格

生长良好

结论

被检培养基适用性检查 合格 不合格

(注：若计数培养基或被检培养基空白有细菌生长，则本次检查无效)

检查人

******

日期

2015年11月05日

复核人

******

日期

2015年11月06日

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